Информации

Уредување на рецепторот на Б-клетки

Уредување на рецепторот на Б-клетки


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Ако клетката Б содржи два mu синџири и два ламбда синџири и е самореактивна, дали може да се врати назад и да ги преуреди своите капа лесни синџири? Не сум сигурен дали може само да се обиде да ги преуреди своите ламбда лесни синџири или дали може да се врати назад и да се обиде да ги преуреди и синџирите на капа.

Позадинска информација: лесниот ланец е помал од двата типа полипептиден синџир во имуноглобулинската молекула. Постојат две класи на лесни ланци познати како капа и ламбда лесни синџири. За време на развојот на Б-клетките, гените на лесниот синџир се преуредуваат. Прво, еден каппа ген е преуреден; ако ова не произведува функционален протеин, тогаш генот каппа на вториот хромозом е преуреден; ако функционалниот протеин сè уште не е произведен, тогаш генот ламбда се преуредува еден по еден хромозом додека не се произведе успешно преуредување.


Краткиот одговор е не.

Еве една статија за преглед со некои докази:

Уредување на Б-клеточните рецептори во толеранција и автоимунитет

Дел: Рецепторско уредување кај глувци со конвенционални трансгени на автоантитела

Ако повеќекратните преуредувања κ не успеат да дадат соодветен L синџир, локусот κ се подложува на преуредување до некодирачки ген наречен RS кај глувците (RS се нарекува елемент што брише κ кај луѓето). Преуредувањето на RS резултира со бришење или инверзија на Cκ, следствено на тоа деактивирање на експресија на κ L синџир на тој алел. Во клеточните линии со λ преуредување, еден или обично двата κ алели се бришат, додека кај Б-клетките што изразуваат κ делот од RS преуредувањата е приближно 15%.

Накратко: По точка со (веројатно повеќекратни) неуспеси во преуредувањето κ, двата локуси κ (обично) се бришат, оставајќи само λ. Значи, ако Б клетка што изразува BCR со λ е самореактивна, нема да има шанса да го преуреди својот κ.

Сепак, има многу повеќе вклучени. Како прво, можно е да се добие функционален и не-самореактивен λ синџир BCR без повторени неуспеси во преуредувањето κ.

Бидејќи цитираниот пасус може да биде збунувачки надвор од контекст, би сакал накратко да спомнам дека описот на вашето прашање за рекомбинација на лесни ланци е многу поедноставен. Во реалноста, постојат многу дополнителни механизми вклучени и многу различни патишта за да се добие функционално преуредување κ, функционално λ преуредување, ниту едното, па дури и двете. Покрај тоа, има многу што не знаеме, бидејќи учиме еден по еден експеримент и не можеме секогаш директно да измериме што би сакале.

Прво, беше забележано дека преуредувањето се случува истовремено во κ и λ. Овој факт може да објасни зошто е можно веднаш да се добие функционален BCR синџир λ како што е споменато погоре. Второ, алелното исклучување (помеѓу κs и двете λ) не функционира секогаш како што очекуваме јас и вие, а Б клетка во развој може да изрази различни BCR истовремено (дури и едната со κ, а другата со λ). Трето, поради уредувањето на рецепторите, Б-клетката има повеќекратни можности за функционално преуредување κ синџир на еден хромозом, што значи дека ниту λ ниту вториот κ не се потребни и покрај првично нефункционалното преуредување κ.

Силно препорачувам да ја прочитате статијата за преглед!


Уредувањето на рецепторите е главниот механизам на толеранција на Б-клетките кон мембранските антигени

Самореактивни Б-клетки специфични за сеприсутните автоантигени поврзани со мембраната се елиминираат во коскената срцевина со два механизми на толеранција: уредување на рецепторот и клонално бришење. Сепак, релативниот придонес на клоналното бришење и уредувањето на рецепторите за толеранција на Б-клетките кај поликлоналната Б-клеточна популација не се утврдени. Овде покажуваме дека толеранцијата кон мембрански антиген-реактивен клеточен клон Б делува со уредување на рецепторите со многу минимална загуба на клетки. Капацитетот на уредување на рецепторот да ги спаси речиси сите автореактивни Б-клетки од бришење се потпира на достапноста на повеќе спојувачки генски сегменти на лесни ланци како супстрат за секундарно преуредување на генот на лесниот синџир на имуноглобулин и е независен од афинитетот на автоантигенот и присуството на не-автореактивни Б-клетки. Нашите податоци дополнително сугерираат дека клоналното бришење е стандардна патека што функционира само кога уредувањето на рецепторите е исцрпено.


Експериментални процедури

Генерација на тетрамери. DWEYSVWLSN-стрептавидин-алофикоцијанин (DWEYS-APC) тетрамери, DWEYSVWLSN-стрептавидин-Alexa Fluor488 (DWEYS-A488) тетрамери и ADGSG-GRDEMQASMWS-тетрамери (1) генерирани (1-2-APCAP) стрептавидин-алофикоцијанин (DWEYSVWLSN) Биотинилираниот пептид беше синтетизиран од AnaSpec (Сан Хозе, Калифорнија). Флуоресцентниот стрептавидин е купен од Molecular Probes. Инхибиторот користел неозначен стрептавидин.

Глувци и имунизации. Женките BALB/c и BALB/c SCID глувци (The Jackson Laboratory) од шест до 8 недели беа сместени во согласност со прописите на Американското здружение за лабораториска нега на животни. Глувците BALB/c × RAG2:GFP беа генерирани со вкрстување на глувци BALB/c со RAG2:GFP глувци на позадина C57BL/6 × 129 (великодушно донирани од D. Nemazee, Scripps Research Institute, La Jolla, CA). Глувците беа имунизирани и.п. на ден 0 со 100 μl од 1:1 емулзија од комплетен адјувант на Фројнд (Difco) кој содржи 100 μg DWEYSVWLSN пептид на разгранет полилизински столб (DWEYS-MAP, AnaSpec) или 100 μg од 10-2 пептид на BSA . На 7-ми ден, глувците беа засилени со 100 μg DWEYS-MAP во нецелосен адјувант на Фројнд (Difco).

За повеќе детали, видете Текст за поддршка, која е објавена како придружна информација на веб-страницата на PNAS.

Проточна цитометрија. Слезините беа собрани од имунизирани глувци. Коскената срцевина беше собрана од тибија и бедрена коска. Еритроцитите беа лизирани, а клеточните суспензии беа обоени во балансиран раствор на сол на Хенкс (Invitrogen/Gibco) со 0,3% FCS, pH 7,4. Инхибиторот беше додаден на клеточните суспензии пред да се обојува со 10-кратен моларен вишок. Користени се следните антитела: фикоеритрин (PE)-анти-CD24 (HSA, клон M1/69, Pharmingen), APC-анти-CD45R (B220, клон RA3-6B2, Pharmingen), PE-anti-C1qRp (AA4.1 , eBioscience), FITC-анти-GL7 (GL7, Pharmingen), FITC-anti-IgD (11-26c.2a, Pharmingen), PE-анти-IgM (R6-60,2, Pharmingen), PE-анти-λ (коза поликлонален, Southern Biotechnology Associates), FITC-анти-κ (X36, Pharmingen), анти-активна каспаза-3 (CPP32, зајачки поликлонален, Pharmingen) и FITC-анти-зајак-γ (коза поликлонален, Southern Biotechnology Associates).

Податоците беа добиени со користење на FACSCalibur проток цитометар и cellquest софтвер (Becton Dickinson Immunocytometry Systems). Анализата беше извршена со користење на софтвер flojo (TreeStar, Сан Карлос, Калифорнија). Биваријантните парцели се претставени како контури на веројатност од 5%. За повеќе детали, видете Текст за поддршка.

Сортирање на ќелии. За сортирање на популациите на тетрамер, спленоцитите од пет глувци беа здружени и изолирани како што е опишано погоре. Клетките беа инкубирани со по 50 μl биотинилиран анти-CD3e (клон 145-2C11, Pharmingen), анти-CD11b (M1/70, Pharmingen) и анти-CD11c (HL3, Pharmingen) 30 мин на 4°C. Клетките беа измиени, инкубирани со 100 μl на 4 × 10 7 клетки стрептавидински динамони (Dynabeads M-280, Dynal, Brown Deer, WI) 30 мин на 4°C и осиромашени од Т-клетки, макрофаги, моноцити и дендритични клетки на магнет Dynal MPC-1. Боењето беше изведено како што е опишано погоре. Веднаш по сортирањето, клетките беа повторно суспендирани во Тризол (Инвитроген) и замрзнати на -140°C до изолација на РНК.

Сортирањето беше извршено на MoFlo (DakoCytomation, Fort Collins, CO).

Хистологија. Слезините беа отстранети на 15-тиот ден и замрзнати во Tissue-Tek OCT Compound (Miles, Elkhart, IN). Боење беше извршено во 3% FCS + 0,2% Triton X-100 за 30 мин на собна температура. Боење со тетрамер беше изведено на 4°C преку ноќ. Слајдовите беа монтирани во Aqua-Poly/Mount (Polysciences, Inc, Warrington, PA). Беше изведена флуоресцентна микроскопија на AxioCam II (Carl Zeiss Microimaging, Thornwood, NY) со Axiovision 3.1. Беа користени следниве антитела: Alexa Fluor488-анти-GFP (поликлонални зајаци, молекуларни сонди), биотин-анти-CD11b (клон M1/70, Pharmingen), PE-anti-B220 (RA3-6B2, Pharmingen), анти-RAG1 (G109-256, Pharmingen), анти-RAG2 (зајак поликлонален, Pharmingen), стрептавидин-AMCA (Векторски лаборатории). Анти-RAG антителата беа означени со користење на Zenon Alexa Fluor 350 анти-глувче IgG2b или анти-зајак IgG, и Alexa Fluor 488 анти-зајак IgG (молекуларни сонди).

Трансфери за посвојување. За RAG2:GFP +/– трансфери (види Сл. 3Е ), слезините беа отстранети од наивни глувци донатори и лимфоцити изолирани како што е опишано погоре. Глувците добија по 4 × 10 7 клетки со ретро-орбитална инјекција. Две недели по трансферот, глувците приматели беа имунизирани според опишаниот протокол. За повеќе детали, видете Текст за поддршка.

RAG изразување во автореактивни, зрели Б-клетки. (А) Експресија на GFP во B220 + HSA низок тетрамер + Б клетки од DWEYS (пополнети кругови) и 10-2 (отворени кругови) имунизирани RAG2:GFP Tg глувци. (Б) Експресија на GFP во B220 + HSA низок тетрамер + Б клетки по усвоен трансфер и предизвик.

ПЦР во реално време. РНК беше изолирана од сортирани клетки со користење на TriZol реагенс (Invitrogen) следејќи ги препораките на производителот. Случајна RT-PCR со практична хексамер беше изведена на 5 μl РНК со користење на SuperScript II реверзна транскриптаза (Invitrogen) во конечен волумен од 100 μl, според протоколот на производителот. ПЦР во реално време беше изведен со користење на ABI 7900 (Applied Biosystems) и анализиран со користење на sds верзија 2.2. Користени се анализи на ABI Gene Expression Assas, а реакциите беа извршени со користење на TaqMan Universal PCR Master Mix во финален волумен од 10 μl. Стандардните криви беа направени за секој експеримент со користење на вкупната cDNA на слезината и коскената срцевина. Релативната концентрација на шаблонот беше одредена од стандардната крива со користење на Cts утврдени со софтверот SDS. Сите употребени прајмери ​​опфаќаа граница на интрон/егзон. ИД на буквар на ABI беа: RAG2, Mm00501300_m1 AID, Mm0050774_m1 Bcl6, Mm00477633_m1 RNA pol2a, Mm00839493_m1.


Улога на регулаторниот фактор 4 на интерферон во уредувањето на рецепторите

Уредувањето на рецепторите е основното средство преку кое Б-клетките ги ревидираат антигенските рецептори и одржуваат централна толеранција. Претходните студии покажаа дека интерферон регулаторниот фактор 4 (IRF-4) и IRF-8 промовираат преуредување и транскрипција на лесниот ланец на имуноглобулин и транскрипција во пред-Б фаза. Овде, беа анализирани улогите на IRF-4 и -8 во уредувањето на рецепторите. Нашите резултати покажуваат дека секундарното преуредување било нарушено кај IRF-4, но не и кај IRF-8 мутантните глувци, што сугерира дека уредувањето на рецепторите е неисправно во отсуство на IRF-4. Улогата на IRF-4 во уредувањето на рецепторите беше дополнително испитувана кај трансгенски глувци со Б-клетки-рецептори (BCR). Нашите резултати покажуваат дека секундарното преуредување предизвикано од антиген врзан за мембрана беше неисправно кај глувците со недостаток на IRF-4. Нашите резултати дополнително откриваат дека дефектот во секундарното преуредување е потежок кај локусот на имуноглобулинот ламбда отколку кај локусот каппа, што покажува дека IRF-4 е покритичен за ламбда преуредувањето. Ние обезбедуваме докази кои покажуваат дека експресијата на IRF-4 во незрели Б-клетки е брзо индуцирана од само-антиген и дека реконституирањето на експресијата на IRF-4 во IRF-4 мутантните незрели Б-клетки промовира секундарно преуредување. Така, нашите студии го идентификуваат IRF-4 како нуклеарен ефектор на BCR сигнален пат кој промовира секундарно преуредување во фазата на незрели Б-клетки.

Фигури

Односот κ и λ беше нарушен кај глувците со недостаток на IRF-4. Клетките беа…

Неисправна генерација на уредени Б…

Неисправно генерирање на уредени Б-клетки во Ig HEL IRF-4 -/- глувци кои наидуваат на…

Активноста на секундарното преуредување беше неисправна…

Секундарната активност на преуредување беше неисправна кај глувците Ig HEL IRF-4 −/− mHEL.…

Оштетување на секундарната активност на преуредување…

Оштетувањето на активноста на секундарното преуредување кај глувците со недостаток на IRF-4 не беше предизвикано од дефекти…

Израз на IRF-4 во незрели Б…

Експресијата на IRF-4 во незрели Б-клетки брзо се индуцира од самоантиген за да се промовира…


Уредување на Б-клеточните рецептори во толеранција и автоимунитет

Оддел за патологија и лабораториска медицина, Медицински факултет на Универзитетот во Пенсилванија, Филаделфија, Пенсилванија.

Центар за автоимунитет на храмот, Оддел за микробиологија и имунологија, Медицински факултет на Универзитетот Темпл, Филаделфија, Пенсилванија.

Оддел за ревматологија, Катедра за медицина, Медицински факултет на Универзитетот во Пенсилванија, Филаделфија, Пенсилванија

Оддел за патологија и лабораториска медицина, Медицински факултет на Универзитетот во Пенсилванија, Филаделфија, Пенсилванија.

Центар за автоимунитет на храмот, Оддел за микробиологија и имунологија, Медицински факултет на Универзитетот Темпл, Филаделфија, Пенсилванија.

Оддел за ревматологија, Катедра за медицина, Медицински факултет на Универзитетот во Пенсилванија, Филаделфија, Пенсилванија

Апстракт

Уредувањето на рецепторите е процес на тековно преуредување на генот на антителата во лимфоцит кој веќе има функционален антигенски рецептор. Експресијата на функционален антиген рецептор вообичаено ќе го прекине понатамошното преуредување (алелно исклучување). Сепак, лимфоцитите со автореактивни рецептори имаат шанса да избегаат од негативната регулација со „уредување“ на специфичностите на нивните рецептори со дополнителни генски преуредувања на антителата. Како такво, уредувањето ја комплицира хипотезата за клонална селекција бидејќи уредените клетки не се едноставно обдарени доживотно со единствен, непроменлив антигенски рецептор. Понатаму, ако почетниот имуноглобулински ген не е деактивиран за време на процесот на уредување, алелното исклучување е нарушено и Б-клетката може да покаже две специфичности. Овде, го опишуваме откритието на уредувањето, патиштата на уредување на рецепторите во локусите на тешките (H) и лесни (L) синџири и тековните докази за тоа како и каде се случува уредувањето и какви ефекти има тоа врз репертоарот на антителата.


Дискусија

Уредувањето на рецепторите е процес на тековно преуредување по почетен настан на преуредување во развојни и/или автореактивни Б-клетки. Студиите за уредување на рецепторите кај трансгенски глувци со анти-ДНК покажаа дека синџирите на анти-ДНК H се отсутни од репертоарот на зрелите Б-клетки, освен ако не се спарени со синџирот L на уредувачот (4). Дали оваа опсервација се однесува на ендогени анти-ДНК Б-клеточни рецептори кои се појавуваат во нетрансгенски систем, и ако е така, тогаш колку често се појавуваат анти-ДНК клетките во нормален репертоар? За да го тестираме ова, ги одвоивме Б-клетките во фракции кои изразуваат или уредувачки или без уредувачки L синџири и го споредивме VХ репертоар во двете популации.

Користевме глувци без κ L синџири [κ-/κ- (11)], кои имаат едноставно VЛ репертоар составен од еден уредник (λX) и три без уредник (λ1,2,3) L синџири. Претпоставувајќи дека Б-клетките се формирани со широка разновидност на VХ преуредувања во фазата пред-Б-клетки и продолжуваат да имаат еднаква веројатност за асоцијација со една од четирите Vλ/Cλ комбинации додека тие напредуваат низ развојот, VХ Репертоарот треба да биде по случаен избор распределен помеѓу λ1,2,3 и λX. Сепак, откривме дека ВХ секвенците се разликуваа помеѓу двете популации: Б-клеточната популација што го изразува уредувачот L синџир (λX) содржеше поголем дел од клетки кои изразуваат антитела со остатоци од Arg во VХ CDR3 отколку популацијата на Б-клетки кои не изразуваат уредник (λ1,2,3) (40% наспроти 12%, соодветно). Бидејќи ВХоние кои се збогатени со остатоци од Arg веројатно ќе ја врзат ДНК, овие резултати сугерираат дека ендогениот В.Х репертоарот вклучува висока фреквенција на Б-клетки со потенцијал за врзување на ДНК. Иако постои силна корелација помеѓу присуството на остатоци од Arg и врзувањето на ДНК, не знаеме дали тоа е строга корелација. Тековните експерименти го тестираат ова прашање. Овде, ние главно се занимаваме со Arg фреквенциите и како тие се разликуваат во популациите λX и λ1,2,3. Присуството на антитела збогатени со содржина на Arg во λX одделот покажува дека Б-клетките кои изразуваат ендогени VХ репертоарите бараат уредување на рецепторите и тоа уредување не е ограничено на (или артефакт на) Б-клетки кои изразуваат трансгенска анти-ДНК VХс. Сличен заклучок беше постигнат во студиите на κ-макросеб-трансгенски глувци (40).

Нашата анализа покажува дека фреквенцијата на ВХs со Arg во CDR3 во Б-клетките што изразуваат λ1,2,3 е понизок отколку кај Б-клетките што изразуваат λX. Како можеме да ја земеме предвид помалата фреквенција на ВХs со Arg во CDR3 во λ1,2,3 популација? Ако со арг збогатен ВХ + λ1,2,3 комбинациите се автореактивни, како во случајот со 3H9/λ1, клетките што ги носат овие антитела можеби се уредени. Сепак, овој заклучок го носи предупредувањето дека механизмот за уредување што се користи од локусот κ не е достапен за κ-/κ- глувците. Κ-/κ- Б-клетките не можат да уредуваат автореактивни рецептори освен ако користат алтернативни (не-κ) механизми на уредување.

Алтернативен механизам на уредување: алелно вклучување.

Единствениот познат начин за уредување на локусот на L синџирот кај κ-/κ- глувчето е со секундарно преуредување λ, со што се принудува Б-клетката на алелно и/или изотипско вклучување, што е пример со λ1,2,3/λx-двојно изразување Б-клетки. Лимфоцити со два L синџири се опишани кај трансгенски и нормални глувци (28, 29, 41-43). Помеѓу анти-ДНК Б-клетките од Ig трансгенски глувци, алелно вклучени Б-клетки обично коекспресираат уредник L синџир, што имплицира дека овие Б-клетки мора да бидат резултат на уредување. Кај κ-/κ- глувчето, идентификувавме и карактеризиравме популација на Б-клетки кои коекспресираат λ1,2,3 и λX. Кај оваа популација, како и кај популацијата само λX, најдовме висока фреквенција на VХкои имаат Arg во CDR3 (32%). Така, нормалниот репертоар на Б-клетки содржи клетки уредени со изотипско вклучување.

Друг алтернативен механизам на уредување: ВХ Замена.

Секундарното преуредување, исто така, може да ги замени преуредените гени на H синџирот. Првично откриено во Б-клеточни линии (30, 32, 44), ВХ последователно, замената беше демонстрирана кај глувците со Ig knockin (34, 45). Врз основа на трагите на замена, ВХ гените кои се заменети се проценува дека сочинуваат 5-12% од репертоарот на човечкиот H синџир (36). Тука го најдовме ВХ заменски отпечатоци во 7,5% од сите анализирани секвенци на H синџир кај κ-/κ- глувци и слична фреквенција во VХ преуредувања клонирани од Б6 ДНК на слезината. ВХ замената може да игра физиолошка улога во диверзификацијата на репертоарот на Б-клетките врз основа на зачувувањето на вградената RSS секвенца кај повеќето глувци и човечки VХ гени (34). Неодамна беше пријавено дека добитокот ВХ сегментите имаат конзервирани нуклеотидни секвенци (CSNS) кои содржат 13-18 nt лоцирани на VХХ спој (46). Овие низи не припаѓаат ниту на преуреденото VХ ниту на кој било познат добиток ДХ гени. Тие се премногу долги и не се доволно богати со GC за да бидат N нуклеотиди, ниту пак се палиндромни. Тие би можеле да бидат ВХ замена на стапалки. Понатаму, CSNS на говедата е богат со А нуклеотиди (46), карактеристика на отпечатоците во синџирите на глувци и човечки H.

И покрај контрадикторните докази во врска со зачестеноста на ВХ замена како механизам за уредување, ВХ замената не е многу ефикасна (37, 47 –50). Додава наелектризирани амино киселини (најчесто Arg) на VХ CDR3 и, како и конвенционалното преуредување, може да генерира непродуктивни преуредувања. Сепак, бришење на анти-ДНК H синџири од непродуктивниот ВХ замената претставува форма на уредување аналогно на бришењето κ и може да дозволи да се случи преуредување на другиот локус на H синџирот (51).


Алатка за биоинформатика за уредување на B Cell Receptor

Имаме 267 производи за проучување на патеката за уредување на рецепторите Б што може да се примени на Western Blot, Flow Cytometry, Immunocytochemistry/Immunofluorescence, Immunohistochemistry од нашиот каталог на антитела и ELISA комплети.

Моноклонален глушец
Видови Човек, глушец, стаорец
Апликации СБ, МКС/АКО


Т-клеточен рецептор (со дијаграм)| Биологија

Т-лимфоцитите или Т-клетките реагираат само на пептидни фрагменти на протеински антигени кои се прикажани со само-MHC молекули (главен комплекс на хистокомпатибилност). Т-клеточниот рецептор или TCR се разликува од рецепторот на Б-клетките на два важни начини.

Прво, рецепторот на Т-клетките е врзан за мембраната и не се појавува во растворлива форма како што се појавува рецепторот на Б-клетките, второ, рецепторот на Т-клетките е специфичен не само за антиген, туку за антиген во комбинација со молекула кодирана од MHC.

Понатаму, рецепторот на Т-клетките останува поврзан на мембраната со комплекс за трансдукција на сигнал CD3 кој е нековалентно поврзан со рецепторот за да го формира комплексот TCR. TCR е клонски дистрибуиран рецептор, што значи дека клоновите на Т-клетките со различни специфичности изразуваат различни TCRs.

Биохемиските сигнали кои се активираат во Т-клетките со препознавање на антигенот не се трансдуцираат од самиот TCR туку од комплексот TCR. Т-клетките, исто така, изразуваат други мембрански рецептори кои не препознаваат антиген, но учествуваат во одговорите на антигените, тие колективно се нарекуваат помошни молекули. Овие молекули испорачуваат сигнали до Т-клетките кои функционираат во склад со сигналите од комплексот TCR за целосно активирање на клетките.

Препознавањето на антигенот од Т-клетките е специфично не само за антигенот, туку и за молекулата на MHC. Се покажа дека Т-клетките го препознаваат антигенот само кога се претставени на мембраната на APC (клетка што презентира антиген) од страна на само-MHC молекула. Овој атрибут наречен само-MHC рестрикција, го разликува препознавањето на антигенот од Т-клетките од она од Б-клетките.

Беа предложени два модели за да се објасни MHC ограничувањето на Т-клеточниот рецептор. Моделот со двојни рецептори предложи дека Т-клетката има два посебни рецептори, еден за антиген и еден за класа I или класа II MHC молекули. Променетиот само-модел предложи дека Т-клетката поседува единствен рецептор способен да препознава странски антиген, врзан за само-MHC молекула.

Сепак, елегантните експерименти на Џ. Каплер и П. Марак обезбедија поддршка за изменетиот само-модел. За разлика од моделот со двојни рецептори, во кој антигенот и молекулата на MHC се препознаваат одделно, изменетиот само-модел предвидува дека еден рецептор препознава промена во само-MHC молекулите предизвикани од нивната поврзаност со странски антигени.

Структура на Т-клеточните рецептори:

Антигенскиот рецептор на МХЦ ограничените ЦД4+ помошни Т-клетки и ЦД8+ цитотоксичните Т-клетки е хетеродимер кој се состои од два транс-мембрански полипептидни синџири. Овие синџири се означени како α и β кои се ковалентно поврзани едни со други со дисулфидни врски (сл. 6.58). Друга група на TCR, пронајдена на мала подгрупа на Т-клетки, има y и δ синџири.

Во амино терминалот, секој синџир и β-синџир се состои од променлив домен сличен на Ig (V), еден константен домен (C), хидро и шифобичен транс-мембрански регион и краток цитоплазматски регион. Така, екстрацелуларниот дел од αβ хетеродимерот во TCR е структурно сличен на фрагментот за врзување на антигенот (Fab) на молекулата на Ig.

α и β синџирите на V региони на TCR содржат кратки делови од аминокиселини каде што се наоѓаат хиперпроменливите или комплементарните детерминирачки региони (CDRs). Три такви CDR во ланецот α се сопоставени на три слични региони во β синџирот за да формираат дел од TCR што конкретно ги препознава комплексите пептид-MHC.

Доменот на P синџирот V содржи четврт хиперпроменлив регион, кој се чини дека не учествува во препознавањето на антигенот, но е место за врзување за микробните производи наречени супер антигени. Регионите C и на α и на β синџирите продолжуваат во кратки шарки, кои содржат остатоци од цистеин кои придонесуваат за дисулфидна врска што ги поврзува двата синџири.

По шарката следи хидрофобен трансмембрански дел од 21 или 22 аминокиселини. Во синџирот, позитивно наелектризираните остатоци од аминокиселини како лизин и во (3 ланци на лизин или аргинински остатоци се присутни во трансмембранскиот дел. И α и β синџирите имаат карбоксилни терминални цитоплазматски опашки кои се долги од 5 до 12 амино киселини.

Секој TCR синџир, како тешките и лесните синџири на Ig, е кодиран од повеќе генски сегменти кои подлежат на соматски преуредувања за време на созревањето на Т-лимфоцитите. Во α и β синџирите на TCR, третите хипер-променливи региони (CDR3) се составени од секвенци кодирани од V и J (спојувачки) генски сегменти (во α синџирот) или V, D (диверзитет) и J сегменти (во β синџирот).

Регионите CDR3 исто така содржат секвенци кои не се присутни во геномот, но се кодирани од различни типови на нуклеотидни додатоци, таканаречени N региони и P нуклеотиди. Така, најголемиот дел од варијабилноста на секвенцата во TCRs е концентрирана на CDR3.

CDR на рецепторот на Т-клетки и нивната улога во препознавање на пептиди поврзано со MHC:

Различни експериментални студии покажаа дека и α и β синџирите на TCR формираат единствен хетеро-димерен рецептор кој е одговорен и за специфичноста на антигенот и за ограничувањето на MHC на Т-клетката. Местото за врзување на антигенот на TCR е рамна површина формирана од CDR на α и β синџири.

TCR го контактира комплексот пептид-MHC во дијагонална ориентација, вклопувајќи се помеѓу високите точки на MHC α спиралите. Општо земено, CDRl јамката на TCR α и β синџирите се позиционирани над краевите на врзаниот пептид.

Јамките CDR2 се над спиралите на молекулата MHC, а јамката CDR3 е позиционирана над центарот на пептидот поврзан со MHC. Всушност, страничниот синџир од само еден или два аминокиселински остатоци од MHC врзаниот пептид воспоставува контакт со TCR. Т-клетките имаат многу извонредна способност да разликуваат различни антигени врз основа на многу малку аминокиселински разлики и смирувања.

Афинитетот на TCR за комплексот пептид-MHC е многу низок. Ваквиот низок афинитет на специфично врзување на антиген е веројатната причина што се потребни дополнителни молекули за да се стабилизира адхезијата на Т-клетките на APCs. TCR и дополнителните молекули во плазма мембраната на Т-клетките се движат координирано со нивните лиганди во APC мембраната за да формираат минлива надмолекуларна структура која се нарекува имунолошка синапса.

Оваа структура ја регулира трансдукцијата на сигналот посредувана од TCR. Практично сите Т-клетки кои изразуваат αβ TCR се MHC ограничени и ги изразуваат или CD4 или CD8 корецепторите. Мала популација на Т-клетки, исто така, изразува маркери кои се наоѓаат на NK (природните убијци) клетки, тие се нарекуваат NK-T-клетки.

Комплекс на рецептори на Т клетки: TCR CD3:

Експериментите на Ј.

Експресијата на молекулата CD3 е потребна за мембранската експресија на рецепторите на αβ и yδ Т-клетките, така што секој хетеродимер формира комплекс со ЦД3 на Т-клеточната мембрана. Губењето на гените што ги кодираат синџирите CD3 или TCR резултира со губење на целиот молекуларен комплекс од мембраната.

CD3 е комплекс од пет непроменливи полипептидни синџири кои се поврзуваат за да формираат три димери: хетеродимер од гама и ипсилон синџири (yɛ), хомодимер од делта и ипсилон синџири (δɛ) и хетеродимер од два зета синџири (ϚϚ) или a хетеродимер на зета и ета синџир (Ϛƞ) (сл. 6.59).

Синџирите Ϛ и ƞ, иако кодирани од истиот ген, може да се разликуваат во нивните карбоксилни завршни краеви поради разликите во спојувањето на РНК на примарниот транскрипт. Околу 90% од CD3 комплексите испитани до денес имаат ϚϚ хомодимер отколку хетеродимер Ϛƞ како што го поседуваат останатите 10% од CD3 комплексите.

Во CD3 комплексот, синџирите y, δ и ɛ припаѓаат на суперфамилијата на имуноглобулини, секој од нив содржи екстрацелуларен домен проследен со трансмембрански регион и цитоплазматичен домен со повеќе од 40 амино киселински остатоци.

Синџирите зета и ета (Ϛ и ƞ) имаат сосема различна структура, секој со многу краток екстрацелуларен регион од само 9 амино киселини, трансмембрански регион и долга цитоплазматска опашка од 113 амино киселини во Ϛ синџир и 155 амино киселини во ƞ синџир.

Трансмембранскиот сегмент на сите CD3 полипептидни синџири содржи негативно наелектризиран остаток на аминокиселина на аспарагинската киселина. Таквите остатоци му овозможуваат на комплексот ЦД3 да комуницира со еден или два позитивно наелектризирани амино киселински остатоци во трансмембранскиот сегмент на секој TCR синџир.

Цитоплазматските домени на CD3 Ƴ, ɛ и δ синџири содржат по една копија од мотивот на зачувана секвенца наречена мотив за активирање базиран на имунорецептор на тирозин (ITAM) во секој синџир. ITAM содржи две копии од секвенцата тирозин-X-X-леуцин (X е неодредена амино киселина) одделени со шест до осум остатоци.

ITAM игра централна улога во сигнализацијата со комплексот TCR. Тие се наоѓаат и во Ϛ синџирот на комплексот TCR, Iga и IgP протеините поврзани со мембранските Ig молекули на Б-клетките.

Функции на ЦД3 комплексот:

ЦД3 и Ϛ синџирите го поврзуваат препознавањето на антигенот од страна на TCR со биохемиските настани кои водат до функционално активирање на Т-клетките. Најраниот интрацелуларен настан што се јавува во Т-клетките по препознавањето на антигенот е фосфорилацијата на остатоците од тирозин во рамките на ITAM во цитоплазматските опашки на CD3 и Ϛ протеините.

Овие фосфотирозини потоа стануваат места за приклучување за адаптерските протеини и за тирозин киназата со киназа наречена ZAP-70 која се врзува за синџирот Ϛ. Друга киназа која исто така се спојува со фосфотирозин е Fyn која се врзува за ЦД3. Последователното активирање на овие кинази го активира патот за трансдукција на сигналот кој на крајот води до промени во генската експресија во Т-клетките.

Во неколку популации на Т-клетките, втор тип на разновиден, дисулфид поврзан хетеродимер yδ TCR рецептор се изразува наместо αβ TCR. Овој рецептор, исто така, останува поврзан со CD3 и Ϛ протеините. (Овој yδ TCR не треба да се меша со y и δ синџирите на CD3 комплексот). TCR y и δ синџирите содржат екстрацелуларни V и C домени, кратки сврзувачки или шарки региони, хидро и схифобни трансмембрански сегменти и кратки цитоплазматски опашки.

Составите на овие сегменти се речиси слични на оние на α и β синџирите. Понатаму, сигналните настани со посредство на TCR – типични за Т-клетките што изразуваат αβ се исто така забележани во yδ Т-клетките. Сепак, поголемиот дел од yδ Т-клетките не изразуваат CD4 или CD8.

Процентот на yδ TCR кои изразуваат Т-клетки варираат во различни ткива и видови, но генерално, помалку од 5% од сите Т-клетки го изразуваат овој рецептор. Т-клетките со yδ TCR се лоза различна од T-клетките што изразуваат αβ-MHC-ограничени.

Многу δy Т-клетки присутни во различни органи, може да имаат различни V региони, што покажува дека овие подмножества може да бидат специфични за различни лиганди. Една интригантна карактеристика на yδ Т-клетките е нивното изобилство во епително ткиво на одредени видови (на пример, слузокожата на тенкото црево кај глувци и пилешко). Кај луѓето само околу 10% од цревните интра-епителни Т-клетки ги изразуваат yδ рецепторите.

Функцијата на yδ Т-клетките не е јасна. yδ Т-клетките не препознаваат пептидни антигени поврзани со MHC и не се ограничени со MHC. Некои можат да препознаат мали фосфорилирани молекули, алкил амини или липиди кои вообичаено се наоѓаат во асоцијација со „некласични“ молекули слични на MHC од класа I во микобактериите и другите микроби.

Други може да препознаат протеински или непротеински антигени за кои не е потребна обработка или некој посебен тип на APC за нивната презентација. Некои сугерираат дека тие можат да иницираат имунолошки реакции на мал број на вообичаени микроби кои често се среќаваат на епителните граници помеѓу домаќинот и надворешната средина.

Додатни молекули на Т Цell рецептор:

T cells express several integral membrane proteins that play important role in antigen recognition and T cell activation. Some of these molecules strengthen the interaction between T cells and antigen presenting cells or target cells some act in signal transduction and some do both. These protein molecules are often collectively called accessory molecules.

Mature αβ T cells express either CD4 or CD8 membrane protein, but not both. CD4 and CD8 interact with class II and class I MHC molecules, respectively, when the antigen receptor of T cells specifically recognise peptide-MHC com­plexes on APCs.

Both CD4 and CD8 are trans membrane glycoprotein members of the Ig superfamily, with similar functions but different structures. CD4 is a 55-kDa monomeric protein that contains four extracellular domains (D1-D4), a hydrophobic trans membrane segment and a long cytoplasmic tail of 38 basic amino acids (Fig. 6.60). It binds through its two N-terminal domains to non-polymorphic β2 domain of the class II MHC molecule.

Most CD8 molecules exist as disulfide-linked heterodimers composed of two related chains called CD8α and CD8β. Both the a and 8 chains have a single extracellular domain, a hydrophobic trans membrane region and a highly basic cytoplasmic tail of about 25 amino acids long (Fig. 6.60).

The extracellular domain of CD8 binds to the non-polymorphic α3 domain of class I MHC .molecules. Some T cells express CD8αα homodimers, but this form appears to function like the more common CD8αβ heterodimers.

Functions of CD4 and CD8:

CD4 binds to class II MHC molecules and is expressed on T cells whose TCRs recognise complexes of peptide and class II MHC molecules. Most CD4 + class II-restricted T cells are cytokine-producing helper cells (TH cells) and function in host defence against extracellular microbes. CD8 binds to class I MHC molecules and is expressed on T cells whose TCRs recognise complexes of peptide and class I MHC molecules.

Most CD8 + class I-restricted T cells are CTLs (cytotoxic T lymphocytes) which serve to eradicate infections by intracellular microbes. However, in humans, some CD4 + T cells may function as CTLs, but even these are class II restricted. Thus, expression of CD4 or CDS determines the MHC restriction of the T cells and not their functional capabilities.

CD4 and CD8 participate in the early signal transduction events that occur after T cell recognition of peptide MHC complexes on APCs. This signal transduction is mediated by a T cell specific Src family tyrosine kinase called Lak that is non-covalently but tightly associated with cytoplasmic tails of both CD4 and CD8. This kinase is also required for T cell maturation and activation.

CD4 and CDS promote the adhesion of MHC-restricted T cells to APCs or target cells expressing peptide MHC complexes. However, in such strengthening function, both co-receptors need the help of other accessory molecules.

The CD4 act as a receptor for the human immunodeficiency virus.

CD28 is a homo­dimer membrane protein that is expressed on more than 90% of CD4+ T cells and on 50% of CD8 + T cells in humans. Binding of B7 molecules on APCs to CD28 delivers signals to the T cells that induce the expression of anti-apoptotic proteins, stimulate production of growth factors and other cytokines and thus promote T cell proliferation and diffe­rentiation. Thus CD28 is the principal receptor for delivering signals for T cell activation.

A second receptor for B7 molecule was discovered later and called CTLA-4. It is structurally homologous to CD28 but is expressed on recently activated CD4 + and CD8 + T cells. It inhibits T cell activation by counteracting signals delivered by CD28. Thus, CTLA-4 is involved in terminating T cell responses.

CD45, a cell surface glyco­protein is believed to play a role in T cell acti­vation. Various forms of CD45 are expressed on immature and mature leucocytes like T and B cells, thymocytes, mononuclear phagocytes and polymorphonuclear leucocytes.

CD2 is a glycoprotein present on more than 90% of mature T cells, 50% of thymocytes and on NK cells. It functions both as an intercellular adhesion molecule and as a signal transducer.

(iv) Adhesion molecules:

Some accessory molecules of T cells function as intercellular adhesion molecules and play important roles in the interactions of T cells with APCs. These molecules also help in the migration of T cells to sites of infection and inflammation. The major adhesion molecules of T cells include integrins, selectins and CD44.

The major functions of integrins are to mediate adhesion of T cells to APCs, endo­thelial cells and extracellular matrix proteins. The T cell selecting mediates the migration of naive T cells into lymph nodes, where anti­gens are concentrated and immune responses are initiated.

Selectins also help in the migration of effector and memory T cells to sites of inflammation. CD44 is responsible for the retention of T cells in extravascular tissues at sites of infection. It also causes rapid binding of activated and memory T cells to endothelium at sites of inflammation and in mucosal tissues.


The B-cell receptor in control of tumor B-cell fitness: Biology and clinical relevance

Stefano Casola, The FIRC Institute of Molecular Oncology (IFOM), Milan, Italy.

The FIRC Institute of Molecular Oncology (IFOM), Milan, Italy

Tumor Immunology Unit, Department of Health Sciences, University of Palermo, Palermo, Italy

Tumor and Microenvironment Histopathology Unit, The FIRC Institute of Molecular Oncology (IFOM), Milan, Italy

Department of Emergency and Organ Transplantation (D.E.T.O.), Hematology Section, University of Bari, Bari, Italy

Pathology and Lymphoid Malignancies Units, Ateneo Vita-Salute San Raffaele Scientific Institute, Milan, Italy

Department of Molecular and Translational Medicine, Section of Pathology, University of Brescia, Brescia, Italy

The FIRC Institute of Molecular Oncology (IFOM), Milan, Italy

Stefano Casola, The FIRC Institute of Molecular Oncology (IFOM), Milan, Italy.

The FIRC Institute of Molecular Oncology (IFOM), Milan, Italy

Tumor Immunology Unit, Department of Health Sciences, University of Palermo, Palermo, Italy

Tumor and Microenvironment Histopathology Unit, The FIRC Institute of Molecular Oncology (IFOM), Milan, Italy

Department of Emergency and Organ Transplantation (D.E.T.O.), Hematology Section, University of Bari, Bari, Italy

Pathology and Lymphoid Malignancies Units, Ateneo Vita-Salute San Raffaele Scientific Institute, Milan, Italy

Department of Molecular and Translational Medicine, Section of Pathology, University of Brescia, Brescia, Italy

Резиме

Surface expression of a functional B cell antigen receptor (BCR) is essential for the survival and proliferation of mature B cells. Most types of B-cell lymphoproliferative disorders retain surface BCR expression, including B-cell non-Hodgkin lymphomas (B-NHL) and chronic lymphocytic leukemia (CLL). Targeting BCR effectors in B-NHL cell lines in vitro has indicated that this signaling axis is crucial for malignant B cell growth. This has led to the development of inhibitors of BCR signaling, which are currently used for the treatment of CLL and several B-NHL subtypes. Recent studies based on conditional BCR inactivation in a MYC-driven mouse B-cell lymphoma model have revisited the role of the BCR in MYC-expressing tumor B cells. Indeed, lymphoma cells losing BCR expression continue to grow unless subjected to competition with their BCR-expressing counterparts, which causes their elimination. Here, we discuss the molecular nature of the fitness signal delivered by the BCR to MYC-expressing malignant B cells, ensuring their preferential persistence within a rapidly expanding tumor population. We also review growing evidence of Ig-negative cases belonging to several B-NHL subtypes and CLL, and discuss the clinical implications of these findings in relation to an emerging picture of clinical resistances to anti-BCR therapies.


БЛАГОДАРНИЦА

Grant Number 020663 from the Fondo de Investigaciones Sanitarias del Ministerio de Sanidad y Consumo, Spain, to C. M. supported this work. M. C. is supported by the Fundación Leucemia y Linfoma, Spain. We thank Mariano Vitón for excellent technical assistance and Dr. R. González-Amaro, Dr. L. del Peso, and Dr. C. Peel for critical reading of the manuscript. We also acknowledge the Department of Oto-Rhino-Laringology for providing the tonsils and Dr. L. Carmona and Dr. F. Rodríguez for statistical analysis.


Погледнете го видеото: Крылышки томленые в сливках от КУМА (Јуни 2022).


Коментари:

  1. Nikolar

    Lovely topic

  2. Yasuo

    Се извинувам што се мешав, сакав да го искажам и моето мислење.

  3. Rahimat

    Nothing serious, I think.



Напишете порака